服務(wù)熱線(xiàn)
400-021-2021
歡迎訪(fǎng)問(wèn)鏡像綺點(diǎn)(上海)細胞技術(shù)有限公司網(wǎng)站
15141133427您的位置:首頁(yè) > 產(chǎn)品中心 > 細胞分類(lèi) > CRO實(shí)驗服務(wù) > iCell-011細胞HE染色
產(chǎn)品中心產(chǎn)品介紹
HE染色全名為蘇木精(hematoxylin)和伊紅(eosin)染色方法,是基本的也是重要的病理學(xué)染色技術(shù)。
HE染色是目前國內外病理診斷上廣泛采用的 常規染色方法。一張好的HE切片是保證正確病理診斷的關(guān)鍵。切片質(zhì)量的好壞,可直接影響疾病診斷的及時(shí)與準確性。作為一個(gè)合格的實(shí)驗技術(shù)員,能制作出一張高質(zhì)量的HE染色切片,是必須掌握的一門(mén)重要功課。
HE染色的實(shí)驗原理及注意事項
一、細胞核染色原理:
蘇木精為堿性天然染料,可使細胞核著(zhù)色。細胞核內染色質(zhì)的成分主要是DNA,在DNA的雙螺旋結構中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA雙螺旋的外側帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。
二、細胞漿染色原理:
細胞漿內主要成分是蛋白質(zhì),為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系,當pH調到蛋白質(zhì)等電點(diǎn)4.7-5.0時(shí),胞漿對外不顯電性,此時(shí)酸或堿性染料不易染色。當pH調到6.7-6.8時(shí),大于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)pH值,表現酸性電離,而帶負電荷的陰離子,可被帶正電荷的染料染色,現時(shí)胞核也被染色,核和胞漿難以區分。因此必須把pH調至胞漿等電點(diǎn)以下,在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷(陽(yáng)離子),就可被帶負電荷(陰離子)的染料染色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質(zhì)的氨基正電荷(陽(yáng)離子)結合而使細胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織,嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明的對比。
三、分化作用:
染色后,用某些特定的溶液將組織過(guò)多結合的染色劑脫去,這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為分化作用,所用的溶液稱(chēng)為分化液。在HE染色中用0.5%鹽酸乙醇作為分化液,因酸能破壞蘇木精的醌型結構,使組織與色素分離而褪色。經(jīng)蘇木精染色后,必須用0.5%鹽酸乙醇分化,使細胞核過(guò)多結合的蘇木精染料和細胞漿吸附的蘇木精染料脫去,在進(jìn)行伊紅染色,才能保證細胞核與細胞漿染色的分明。因此,在HE染色中分化是極為關(guān)鍵的一步。
四、返藍作用:
分化之后,蘇木精在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài),呈紅色,在堿性條件下處于藍色離子狀態(tài),呈藍色。組織切片經(jīng)0.5%鹽酸乙醇分化后呈紅色或粉紅色,故分化之后,立即用水除去組織切片上的酸而終止分化,再用弱堿性水(0.2%氨水)使蘇木精染上的細胞核呈現藍色,這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為返藍作用或藍化作用。另外用自來(lái)水浸洗也可使細胞核返藍,但所需時(shí)間較長(cháng)。
實(shí)驗材料
固定液:常用95%乙醇和冰丙酮
蘇木精染液:稱(chēng)取蘇木精粉0.5g,銨礬24g溶解于70ml蒸餾水中,然后取NaIO 31g,水5ml,再加入甘油30ml和冰醋酸2ml,混合均勻,濾紙過(guò)濾,備用。
伊紅染液:稱(chēng)取0.5g水溶性伊紅染液,溶于100ml蒸餾水中。
稀鹽酸乙醇溶液:用75%乙醇配制1%鹽酸。
系列濃度的乙醇、二甲苯、中性樹(shù)膠。
培養瓶、培養皿、眼科鑷、蓋玻片、載玻片、顯微鏡。
實(shí)驗步驟
樣品制備:對于貼壁生長(cháng)細胞,胰酶消化,調整細胞濃度約1×105/ml,滴加于蓋玻片上(置于6孔板中),培養相應時(shí)間后,取出細胞爬片,用PBS 洗滌3次。
樣品固定:95%乙醇固定20min,PBS洗滌2次,每次1min。
染核:蘇木素染液染色2-3min,自來(lái)水洗滌。
分色:鏡下觀(guān)察,若細胞核染色過(guò)深,用1%鹽酸酒精溶液分色數秒,自來(lái)水洗滌。
染胞質(zhì):浸入伊紅染液染色1min,自來(lái)水洗滌。
吹干或自然晾干細胞 爬片后,中性樹(shù)膠封片。
若細胞用4%多聚甲醛固定,則染色時(shí)間相應延長(cháng),蘇木素染色12-15min,伊紅5min即可。
實(shí)驗結果及注意事項
實(shí)驗結果
細胞核呈藍色,細胞質(zhì),肌纖維,膠原纖維和紅細胞呈不同程度的紅色。鈣鹽和細菌可呈藍色或紫藍色
注意事項:
1. 染色時(shí)調節pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時(shí)間長(cháng),組織酸化而影響細胞核著(zhù)色。因此,要在自來(lái)水中沖洗時(shí)間長(cháng)一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min,這樣可以使細胞核著(zhù)色較深。染伊紅時(shí)胞漿著(zhù)色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
2. 切片染蘇木精后,分色這一步是關(guān)鍵,應在顯微鏡下控制進(jìn)行,一般以細胞核染色清楚(晰)而細胞質(zhì)基本無(wú)色為佳。如果過(guò)分延長(cháng)分色時(shí)間將導致染色太淺,應重新染色后再行分色。
3. 切片經(jīng)酒精脫水后,入二甲苯時(shí)可出現白色不透明狀態(tài),此為脫水不*,應將切片退回*,更換酒精、二甲苯,以求*脫水與透明。
4. 在染色過(guò)程中不要讓切片干燥,以免切片收縮、變形,影響神經(jīng)元形態(tài)。
5. 切片從二甲苯取出或進(jìn)入二甲苯前,切片周邊均應擦干凈或吸干多余水分。
6. 后封固時(shí),要用中性樹(shù)脂,防止日后褪色,蓋片要選大于組織塊的面積,如漏出一部分不久將會(huì )褪色,所用樹(shù)脂濃度要適當,樹(shù)脂封固時(shí)不能有氣泡。
服務(wù)流程:
1.聯(lián)系我們,溝通客戶(hù)實(shí)驗計劃及目標,評估實(shí)驗的的可行性。
2.依照客戶(hù)要求,設計相應的實(shí)驗;或客戶(hù)已有實(shí)驗方案發(fā)送給我們,我們研究方案的可操作性。
3.確定終的實(shí)驗方案,報價(jià)和周期。
4.簽訂服務(wù)合同,支付預付款。
5.開(kāi)始實(shí)驗服務(wù),并定期向客戶(hù)反饋和交流。
6.實(shí)驗完成,提供完整實(shí)驗說(shuō)明和部分實(shí)驗結果。
7.支付尾款,向客戶(hù)提供完整的全部實(shí)驗報告和原始數據。
8.項目完成。
相關(guān)產(chǎn)品
鏡像綺點(diǎn)(上海)細胞技術(shù)有限公司地址:上海市奉賢區茂園路260號臨港南橋科技城56號樓7層 郵箱:1002469798@qq.com
公司版權所有 © 2024 備案號:滬ICP備2024064724號-1 管理登陸 技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) GoogleSitemap