服務(wù)熱線(xiàn)
400-021-2021
您的位置：首頁(yè) > 產(chǎn)品中心 > 細胞分類(lèi) > CRO實(shí)驗服務(wù) > iCell-CRO01穩定細胞株構建/鏡像綺點(diǎn)（iCell）
產(chǎn)品中心
-
產(chǎn)品名稱(chēng)：
穩定細胞株構建/鏡像綺點(diǎn)（iCell）
產(chǎn)品型號： iCell-CRO01產(chǎn)品時(shí)間： 2024-08-05描述：穩定細胞株構建/鏡像綺點(diǎn)（iCell）細胞介紹穩定細胞株構建（穩定表達細胞株）指在細胞中持續穩定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩轉細胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細胞染色體上，使細胞長(cháng)期穩定表達該基因。穩轉細胞株包括多克隆穩轉細胞株和單克隆穩轉細胞株。慢病毒感染目的細胞后，通過(guò)抗性基因篩選得到的細胞株是多個(gè)細胞克隆的組合。
產(chǎn)品介紹
穩轉細胞系（穩定表達細胞株）指在細胞中持續穩定表達特定基因或干擾特定基因表達。穩轉細胞株的目的基因質(zhì)粒DNA整合到細胞染色體上，使細胞長(cháng)期穩定表達該基因。穩轉細胞株包括多克隆穩轉細胞株和單克隆穩轉細胞株。慢病毒感染目的細胞后，通過(guò)抗性基因篩選得到的細胞株是多個(gè)細胞克隆的組合。單克隆細胞株是從多克隆細胞中經(jīng)細胞克隆挑選得到的，由一個(gè)細胞擴增得到的細胞株。單克隆細胞株性狀統一，傳代過(guò)程中細胞的基因表達保持穩定。
用轉染質(zhì)?；虿《厩秩镜姆椒▽嫿ê玫暮谢虻妮d體導入細胞，根據不同的基因載體中所含的抗性標志選用相應的藥物進(jìn)行篩選混合陽(yáng)性克隆。在陽(yáng)性混合克隆的基礎上，得到單細胞長(cháng)出的陽(yáng)性單克隆，繼而得到穩定轉染細胞株。常用的真核表達載體的抗性標志物有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）和新mei素（neomycin）。
篩選穩定細胞株的兩種方法
1、轉染質(zhì)粒后，單克隆方法篩選穩定細胞系
對大多數細胞轉染效率較低。對于基因過(guò)表達，如果轉染效率達到40%，基因過(guò)表達尚可。但是對于基因干擾實(shí)驗，對轉染效率要求遠遠高于基因過(guò)表達，通常質(zhì)粒轉染無(wú)法滿(mǎn)足。
另外，質(zhì)粒游離于細胞質(zhì)中，很快降解，無(wú)法滿(mǎn)足較長(cháng)時(shí)間的檢測項目；質(zhì)粒轉染整合幾率極低，穩定細胞株構建耗時(shí)耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。
2、病毒感染篩選穩定細胞株
病毒感染方法較質(zhì)粒轉染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩轉細胞株，由于其高效整合、高效轉錄、高效表達、宿主范圍廣，感染效率高，且與細胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩定細胞株的理想載體。
穩定細胞株構建/鏡像綺點(diǎn)（iCell）
服務(wù)流程
1、載體構建：將外源基因構建到合適的載體上，如需病毒轉染，則包裝病毒。
2、篩選濃度測定：以 10-14 天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度。
3、細胞接種：轉染實(shí)驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種細胞的生長(cháng)率和細胞形狀而定。進(jìn)行轉染當天細胞應達到 60%-80% 覆蓋。
4、細胞轉染：用構建好的載體（或包裝好的病毒）轉染目的細胞。
5、抗生素篩選。
6、鑒定篩選結果。
終交付
1、病毒滴度檢測報告；穩轉細胞株；
2、結題報告，包括詳細的實(shí)驗流程，測序結果和峰圖、引物序列、載體圖譜和滴度測定報告和q-P
鏡像綺點(diǎn)（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)：
一、原代細胞服務(wù)
各類(lèi)模式哺乳動(dòng)物的多種原代細胞資源；
多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源；
原代細胞分離和培養相關(guān)試劑、kit、培養基添加劑等；
原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實(shí)驗外包服務(wù)；
二、細胞株/系服務(wù)
細胞株/系培養、增殖、凍存和相關(guān)說(shuō)明書(shū)；
細胞系培養過(guò)程的技術(shù)指導；
細胞系培養基、添加劑、血清及相關(guān)生長(cháng)因子、試劑等；
三、iPS細胞
iPS細胞基礎培養（有滋養層or無(wú)滋養層在）；
iPS細胞增殖及冷凍保存；
iPS基礎培養技術(shù)實(shí)習；
新藥及實(shí)驗儀器上市前評估；
四、技術(shù)外包服務(wù)：各類(lèi)細胞生物學(xué)實(shí)驗、分子生物學(xué)實(shí)驗、顯微鏡拍照服務(wù)等
五、其他：根據客戶(hù)需要定制服務(wù)等
相關(guān)產(chǎn)品