Bv2小鼠小膠質(zhì)細胞/STR鑒定

Bv2小鼠小膠質(zhì)細胞/STR鑒定

細胞介紹

該細胞來(lái)源于德國DSMZ（German collection of microorganisms and cell cultures），源于C57BL/6小鼠小膠質(zhì)細胞，表達核v-myc、染色體v-raf癌基因，表面表達envgp70抗原，在形態(tài)學(xué)、表型及功能上有吞噬細胞的特征。

細胞特性

1） 來(lái)源：小鼠腦

2） 形態(tài)：上皮細胞樣 松散貼壁，懸浮和貼壁細胞混合生長(cháng)

3） 含量：>1x10^6  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。

3）半貼細胞和貼壁不牢（懸?。┘毎篢25瓶置于37℃培養箱中約2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶(hù)需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完quan培養基重懸后打回到原培養瓶中繼續培養，若細胞生長(cháng)70%-90%對細胞進(jìn)行傳代，傳代時(shí)需要收集培養基中懸浮的細胞離心后回收。

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完quan培養基來(lái)培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。       

Bv2小鼠小膠質(zhì)細胞/STR鑒定

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備DMEM 基礎培養基 (推薦：iCell-0001)         87%

      優(yōu)質(zhì)胎牛血清                                                           10%

      GlutaMAX-1谷an酰胺    (推薦：iCell-0900 )         1%

      HEPES 1M Buffer solution  (推薦：iCell-01200)    1%

      P/S青mei素-鏈mei素                                                     1%.

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二． 細胞處理：

1）凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完quan培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完quan培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完quan培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

1. 收集：將培養瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會(huì )脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25％（w / v）yi蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。

3. 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來(lái)的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完quan培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3） 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。

下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時(shí)按照細胞傳代的過(guò)程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來(lái)決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱(chēng)、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

　　鏡像綺點(diǎn)（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

　　1、原代細胞服務(wù)：

　?。?）各類(lèi)模式哺乳動(dòng)物的多種原代細胞資源

　?。?）多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源

　?。?）原代細胞分離和培養相關(guān)試劑、kit、培養基添加劑等

　?。?）原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗外包服務(wù)

　　2、細胞系服務(wù)：

　?。?）細胞株/系培養、增殖、凍存和相關(guān)說(shuō)明書(shū)

　?。?）細胞系培養過(guò)程的技術(shù)指導

　?。?）細胞系培養基、添加劑、血清及相關(guān)生長(cháng)因子、試劑等

　　3、iPS細胞服務(wù)：

　?。?）iPS細胞基礎培養（有滋養層or無(wú)滋養層）

　?。?）iPS細胞增殖及冷凍保存

　?。?）iPS基礎培養技術(shù)實(shí)習

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　　4、其他技術(shù)外包服務(wù)、客戶(hù)定制服務(wù)等

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