THP-1人單核細胞白血病細胞/STR鑒定

THP-1人單核細胞白血病細胞/STR鑒定

細胞介紹

該細胞對乳汁珠和激活的紅細胞有吞噬作用，無(wú)表面和胞質(zhì)免疫球蛋白?？梢杂梅鸩ù?TPA誘導單核細胞分化。

細胞特性

1） 來(lái)源：急性單核細胞白血病，單核細胞

2） 形態(tài)：?jiǎn)魏思毎?，懸?/p>

3） 含量：>1x106 細胞數

4） 規格：T25瓶（15ml離心管）或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）復蘇的存活細胞15mL離心管常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1） 收到細胞后請勿拆除封口膜，75%酒精消毒擦拭瓶壁將15mL離心管置于37℃培養箱放置約1-2h，若發(fā)現離心管破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請在細胞移入2個(gè)新的T25培養瓶后，在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛移入培養瓶的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。

THP-1人單核細胞白血病細胞/STR鑒定

一．培養基及培養凍存條件準備

1） 準備RPMI-1640（推薦iCell-0002）培養基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；0.05 mM β－巰基乙醇(細胞培養級 推薦：iCell-8211)；雙抗，1%。

2） 參考傳代比例：傳代時(shí)控制細胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在細胞生長(cháng)至8-10 ×105cell / mL時(shí)進(jìn)行傳代。

3） 參考換液頻率：傳代時(shí)換液

4） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

5） 凍存液：完quan培養液95%，DMSO 5%（使用該凍存液后，按照我庫的經(jīng)驗復蘇存活率約50%，復蘇后需要額外培養7-10天才能恢復生長(cháng)）

6） 【注意事項】：

該細胞為懸浮細胞，根據培養經(jīng)驗以及客戶(hù)的反饋，傳代時(shí)使用【半換液法】對細胞狀態(tài)較為有利，因此我庫建議您使用【半換液法】進(jìn)行傳代。

1. 您在收到我們提供的用15mL離心管（充液為完quan培養基）發(fā)貨的細胞后，請不要通過(guò)離心的方式收集細胞，可以先準備兩個(gè)新的T25培養瓶，然后將細胞混合均勻后移入兩個(gè)新的T25培養瓶中，補加培養基到10ml。放入到37℃培養箱中。

2. thp-1懸浮細胞。該細胞在培養時(shí)更喜歡溫和處理，培養時(shí)盡量少對細胞進(jìn)行離心處理以此造成對細胞的傷害。換液時(shí)不要全培養基更換，建議您使用【半換液法】進(jìn)行傳代，添加細胞培養基以稀釋細胞至維持密度即可。

3.  細胞對血清質(zhì)量較為敏感，我庫建議您使用進(jìn)口大品pai優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養。FBS不要滅活，如果細胞生長(cháng)緩慢請嘗試使用其他FBS或暫時(shí)將FBS濃度增加到20%

4.  該細胞的培養液中需添加β-巰基乙醇（細胞培養級別），若不添加，可能會(huì )對細胞狀態(tài)造成影響。

β-巰基乙醇的穩定性有限，不可將β-巰基乙醇添加到完quan培養基中長(cháng)期儲存，在每次傳代或液體添加時(shí)再添加β-巰基乙醇。

β-巰基乙醇（2-qiu基乙醇）被添加到淋巴細胞或其他細胞培養物中，因為在培養基中使用的FBS中氨基酸半胱an酸供不應求，而胱an酸則很多。有些細胞（例如T細胞）無(wú)法將半胱an酸轉運到細胞質(zhì)中，必須將其轉化為半胱an酸。β-巰基乙醇將胱an酸還原為可被細胞轉運的形式，然后轉化為細胞生長(cháng)所需的半胱an酸。  β-巰基乙醇還是一種還原劑，可以分解培養中細胞產(chǎn)生的許多有毒代謝產(chǎn)物，從而改善細胞周?chē)沫h(huán)境。

5.  該細胞對細胞密度較為敏感，培養、傳代時(shí)請注意保持細胞密度在合適的范圍（具體請參考細胞說(shuō)明書(shū)）。

6 . 該細胞凍存后復蘇率較低，凍存時(shí)請酌情提高細胞量。

7 .通常情況下可以通過(guò)向正在生長(cháng)的細胞中添加完quan培養基來(lái)維持細胞的生長(cháng)，每7天可以將細胞離心并重懸于新配的培養基中，來(lái)完成細胞的全換液。

ATCC有關(guān)thp-1細胞保持細胞活力的說(shuō)明

（頻繁的細胞計數是監測thp-1的最佳方法。這些細胞應該每2至3天通過(guò)向燒瓶中簡(jiǎn)單加入少量新鮮培養基（使它們具有條件培養基）來(lái)培養。您不需要每次都離心細胞并重新傳代。當在我們的實(shí)驗室中培養時(shí)，到第2天，細胞通?？梢詳U增到具有更多培養基的更大的燒瓶中。當細胞密度達到8×10 5個(gè)活細胞/ ml時(shí)需要進(jìn)行傳代。不允許細胞密度超過(guò)1×10（6）活細胞/ ml。）

二． 細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完quan培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完quan培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完quan培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。

2） 細胞換液: 通常情況下可以通過(guò)向正在生長(cháng)的細胞中添加完quan培養基來(lái)維持細胞的生長(cháng)，每7天可以將細胞離心并重懸于新配的培養基中，來(lái)完成細胞的全換液。

3） 細胞傳代：傳代時(shí)控制細胞密度在2-4 ×105cell / mL，并在細胞生長(cháng)至8-10 ×105cell / mL時(shí)進(jìn)行傳代。

4） 細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。    

1，細胞凍存時(shí)，取上清，可使用血球計數板計數。

2，4min ，1000rpm 離心去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞，根據細胞數量加入凍存液，輕輕混勻，DMSO終濃度為5%，細胞密度2x106/支，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。