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產(chǎn)品中心產(chǎn)品介紹
HELA人宮頸癌癌細胞/STR鑒定
細胞介紹
角蛋白免疫過(guò)氧化物酶染色陽(yáng)性。 有報告稱(chēng)MS751細胞含有人乳頭狀瘤病毒18 (HPV-18)序列。據報道,p53表達水平低,pRB(成視網(wǎng)膜細胞瘤抑制因子)表達水平正常。
細胞特性
1) 來(lái)源:宮頸腺癌
2) 形態(tài):上皮細胞樣,貼壁生長(cháng)
3) 含量:>1x10^6 細胞數
4) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理:
1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養箱中放置2-3h,顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下,可去除培養瓶中灌液培養基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養瓶中),加入新配制的完quan培養基6-8mL,放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上,可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來(lái)培養細胞,請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完quan培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。
HELA人宮頸癌癌細胞/STR鑒定
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備MEM(推薦iCell-0012)培養基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二.細胞處理:
1) 凍存細胞的復蘇:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完quan培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完quan培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完quan培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)yi蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。
3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完quan培養基以保持細胞的生長(cháng)活力,后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
下面T25瓶為例;
1. 細胞凍存時(shí)按照細胞傳代的過(guò)程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來(lái)決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱(chēng)、代數、日期等信息。
3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過(guò)夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
鏡像綺點(diǎn)(上海)細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù):
1、原代細胞服務(wù)
?。?)各類(lèi)模式哺乳動(dòng)物的多種原代細胞資源;
?。?)多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源;
?。?)原代細胞分離和培養相關(guān)試劑、kit、培養基添加劑等;
?。?)原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實(shí)驗外包服務(wù);
2、細胞株/系服務(wù)
?。?)細胞株/系培養、增殖、凍存和相關(guān)說(shuō)明書(shū);
?。?)細胞系培養過(guò)程的技術(shù)指導;
?。?)細胞系培養基、添加劑、血清及相關(guān)生長(cháng)因子、試劑等;
3、iPS細胞
?。?)iPS細胞基礎培養(有滋養層or無(wú)滋養層在);
?。?)iPS細胞增殖及冷凍保存;
?。?)iPS基礎培養技術(shù)實(shí)習;
?。?)新藥及實(shí)驗儀器上市前評估;
相關(guān)產(chǎn)品
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