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HEK-293T人胚腎細胞/STR鑒定
細胞介紹
HEK-293T細胞是293T(293tsA1609neo)細胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物。細胞持續表達SV40抗原,該細胞常用于轉染實(shí)驗,轉染效率較高。(轉染一般以50%密度鋪板,待細胞剛剛貼到皿壁上后(一般8-10小時(shí)),即可進(jìn)行轉染操作)
細胞特性
1) 來(lái)源:人胚胎腎臟
2) 形態(tài):上皮細胞樣,貼壁生長(cháng),貼壁能力較弱
3) 含量:>1x10^6 細胞數
4) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途:僅供科研使用。
運輸和保存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
細胞接收后的處理:
1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3)半貼細胞和貼壁不牢(懸?。┘毎篢25瓶置于37℃培養箱中約2-3h,顯微鏡下觀(guān)察細胞的情況,若細胞密度在60%以下,客戶(hù)需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用wan全培養基重懸后打回到原培養瓶中繼續培養,若細胞生長(cháng)70%-90%對細胞進(jìn)行傳代,傳代時(shí)需要收集培養基中懸浮的細胞離心后回收。
4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來(lái)培養細胞,請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的wan全培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。
HEK-293T人胚腎細胞/STR鑒定
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備DMEM(推薦iCell-0001)培養基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;L-谷an酰胺(2mM)1%;NEAA 1% ; 雙抗 1%
注意:1.該細胞貼壁能力較弱,培養時(shí)可酌情使用預鋪0.2%明膠的培養瓶/培養皿。wan全培養液中需添加熱滅活胎牛血清。細胞生長(cháng)不能過(guò)密,過(guò)密細胞容易脫落,脫落下來(lái)的細胞可以通過(guò)離心收集,使用0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA 消化后繼續培養。
2.如果發(fā)生293T細胞不貼壁,漂浮在培養基中的現象,請確認所使用的DMEM中碳suan氫鈉濃度及培養箱中CO2濃度。并參考以下培養體系:
a) DMEM由1.5 g/L碳suan氫鈉配制而成,使用5%CO2培養箱。
b) DMEM由3.7 g/L碳suan氫鈉配制而成,使用10%CO2培養箱。
當使用碳suan氫鈉含量高的培養基時(shí),必須將這些細胞在10%CO2中孵育,以便正確緩沖培養基。當培養基沒(méi)有適當緩沖時(shí),239T細胞雖然可以存活,但將無(wú)法粘附并保持漂浮在培養基中。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90?S,10%DMSO,現用現配。
二. 細胞處理:
1)凍存細胞的復蘇:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mLwan全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,wan全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mlwan全培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達70%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞,傳代可以參考以下方法:
1. 收集:將培養瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會(huì )脫落所以PBS也要回收到離心管中。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白mei0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL)置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10?S的培養基來(lái)終止消化。
3. 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來(lái)的貼壁細胞以1000rpml離心5min,棄去上清,補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的wan全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力,后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3) 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。
下面T25瓶為例;
1. 細胞凍存時(shí)按照細胞傳代的過(guò)程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來(lái)決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱(chēng)、代數、日期等信息。
3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過(guò)夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。
1.收到細胞后,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細胞先不開(kāi)瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時(shí)(視細胞密度而定)穩定細胞狀態(tài)。接著(zhù)在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況,并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照(建議收細胞時(shí)就整體外觀(guān)拍一張照片,觀(guān)察培養基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀(guān)察記錄細胞在運輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸等多方面因素影響,故本公司只保證客戶(hù)收到細胞后一周內的細胞狀態(tài),故客戶(hù)需要售后時(shí)需出示收到細胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
鏡像綺點(diǎn)(上海)細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù):
一、原代細胞服務(wù)
各類(lèi)模式哺乳動(dòng)物的多種原代細胞資源;
多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源;
原代細胞分離和培養相關(guān)試劑、kit、培養基添加劑等;
原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)和整體實(shí)驗外包服務(wù);
二、細胞株/系服務(wù)
細胞株/系培養、增殖、凍存和相關(guān)說(shuō)明書(shū);
細胞系培養過(guò)程的技術(shù)指導;
細胞系培養基、添加劑、血清及相關(guān)生長(cháng)因子、試劑等;
三、iPS細胞
iPS細胞基礎培養(有滋養層or無(wú)滋養層在);
iPS細胞增殖及冷凍保存;
iPS基礎培養技術(shù)實(shí)習;
新藥及實(shí)驗儀器上市前評估;
四、技術(shù)外包服務(wù):各類(lèi)細胞生物學(xué)實(shí)驗、分子生物學(xué)實(shí)驗、顯微鏡拍照服務(wù)等
五、其他:根據客戶(hù)需要定制服務(wù)等
相關(guān)產(chǎn)品
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