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細胞培養基的構成中動(dòng)物血清對細胞的生長(cháng)繁殖起著(zhù)重要作用。在動(dòng)物血清中牛血清的應用又是zui廣泛的,所以想要細胞在培養過(guò)程中長(cháng)的好、穩定,牛血清的質(zhì)量好壞直接影響生物研究的質(zhì)量和安全性,使用質(zhì)量好的牛血清也是細胞培養中的重要環(huán)節。
血清是提供生長(cháng)激素、營(yíng)養物,以及低分子營(yíng)養物;提供結合蛋白;能結合或調變它們所結合的物質(zhì)活力;是細胞貼壁、鋪展生長(cháng)所需因子的來(lái)源;起酸堿度緩沖液作用;提供蛋白酶抑制劑;細胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受損傷;能與有毒金屬和熱源物質(zhì)結合,起到解毒作用。
血清分類(lèi)
胎牛血清:八月齡胎牛心臟穿刺取血
新生牛血清:出生12-24小時(shí)新生牛靜脈采血
小牛血清:出生三月齡小牛動(dòng)脈采血分離血清
血清來(lái)源
來(lái)自國內非疫區,有說(shuō)明血清來(lái)源的證明資料:包括收集過(guò)程的全部資料、檢驗結果和交付情況。
血清收集
胎牛血清是心臟穿刺取血,新生牛(10~14天)和小牛(10個(gè)月內)血清靜脈取血。血清在低溫下采集、一次分離、分離后立即混合凍存,符合工業(yè)生產(chǎn)的標準。
血清制備
1、熱滅活血清(非必須)
2、γ-射線(xiàn)照射:γ-射線(xiàn)照射可以有效滅活血清中可能污染的病毒、支原體。
3、除菌過(guò)濾:胎牛血清要通過(guò)三層100nm過(guò)濾。
血清質(zhì)檢方法
⑴、化學(xué)檢測
A 生化檢測:膽固醇、甘油三酯、膽紅素 、尿素、尿酸、葡萄糖、谷丙轉氨酶、高筒、體 酮、雌二醇等檢測
B 微量元素檢測:鉀、鈉,鐵、氯化物、鈣、鎂、總鐵結合力、血清唾液酸等檢測
C 蛋白檢測:白蛋白和球蛋白檢測
⑵、微生物檢查
①、細菌和真菌:直接培養法
②、支原體檢測:培養法,DNA熒光染色
③、病毒檢測:直接熒光抗體檢測
牛蘭舌病毒 Bovin blue tongue;
牛腺病毒 Bovine Adenovirus;
牛細小病毒 Bovine Parvovirus;
牛病毒性腹泄病毒 Bovine Viral Diarhea Virus;
狂犬病病毒 Rabies;
呼腸弧病毒 Reovirus;
牛呼吸道合胞病毒 BRSV;
副流感病毒Ⅲ型 Parainfluenza。
工欲善其事必先利其器,所以選擇好的血清也相當的重要,為了更好的培養細胞,一定要選擇正規質(zhì)量好的血清,不要隨便使用便宜的,導致zui后的科研成果不理想。
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