細胞轉染的類(lèi)型及方法

更新更新時(shí)間：2017-10-09 瀏覽次數：3475

轉染（Transfection）是指將DNA或者RNA導入真核細胞中的過(guò)程。轉染的目的是產(chǎn)生重組蛋白，或特異性增強或抑制轉染細胞中的基因表達。細胞轉染有哪些類(lèi)型和方法呢？

1）根據導入的核酸存在于宿主細胞的時(shí)間長(cháng)短，可以分為瞬轉和穩轉。

瞬轉	穩轉
導入的DNA沒(méi)有整合到基因組中，而是保留在細胞核上	導入的DNA整合到基因組中
導入的遺傳物質(zhì)不傳遞到子代；遺傳改變只是暫時(shí)的	導入的遺傳物質(zhì)能夠代代相傳；遺傳改變是*的
不需要選擇性篩選	需要選擇性篩選出穩定轉染的細胞
DNA載體和RNA都可用于瞬時(shí)轉染	只有DNA載體可用于穩定轉染；RNA本身不能穩定地導入細胞中
導入的遺傳物質(zhì)的高拷貝數導致高水平的蛋白質(zhì)表達。	單拷貝數或低拷貝數的穩定整合的DNA導致較低水平的蛋白質(zhì)表達。
通常在轉染后24-96小時(shí)內收獲細胞。	需要2-3周的時(shí)間篩選出穩定轉染的細胞克隆。
通常不適合使用具有誘導型啟動(dòng)子的載體的研究。	適用于使用帶有誘導型啟動(dòng)子的載體的研究。

2）根據轉染方式可以分為化學(xué)，生物，物理方法。

轉染類(lèi)型	轉染方法	原理	應用	特點(diǎn)
化學(xué)轉染法	磷酸鈣法	磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內吞	穩轉，瞬轉	不適用于原代細胞，操作簡(jiǎn)便但重復性差，有些細胞不適用
	陽(yáng)離子脂質(zhì)體法	帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞	穩轉，瞬轉所有細胞	適用性廣，轉染效率高，重復性好，但轉染時(shí)需除血清。轉染效果隨細胞類(lèi)型變化大
	DEAE-右旋糖苷法	帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內吞	瞬轉	相對簡(jiǎn)便、結果可重復，但對細胞有一定的毒副作用，轉染時(shí)需除血清
生物轉入法	病毒介導法	通過(guò)侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中	穩轉	可用于難轉染的細胞、原代細胞，體內細胞等
	逆轉錄病毒		特定宿主	但攜帶基因不能太大細胞需處分裂期，需考慮安全因素
	腺病毒	通過(guò)侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中	瞬時(shí)轉染特定宿主	可用于難轉染的細胞需考慮安全因素
物理轉染法	Biolistic顆粒傳遞法	將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞，DNA在胞內逐步釋放表達	瞬轉	可用于：人的表皮細胞，纖維原細胞，淋巴細胞系以及原代細胞
	電穿孔法	高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過(guò)膜上形成的小孔導入	穩轉，瞬轉所有細胞	適用性廣但細胞致死率高，DNA和細胞用量大
	顯微注射法	用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核	穩轉，瞬轉	轉染細胞數有限，多用于工程改造或轉基因動(dòng)物的胚胎細胞

二、脂質(zhì)體轉染法
1、材料
293T細胞、MyoD表達質(zhì)粒和EGFP表達質(zhì)粒、DMEM培養基、鏈霉素/青霉素(雙抗)、FCS(小牛血清)、PBS(磷酸鹽緩沖溶液)、胰酶/EDTA消化液、轉染試劑(TransFast)
2、器材
20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip頭酒精燈、廢液缸、血球計數板、渦旋振蕩器、恒溫水浴箱、臺式離心機、35mm培養皿、轉染管、15ml離心管、觀(guān)察用倒置顯微鏡熒光顯微鏡和CCD
3、實(shí)驗步驟
細胞傳代
(1)試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養皿，離心管。

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