293T/17 人胚腎細胞 STR鑒定

293T/17 人胚腎細胞  STR鑒定

細胞介紹

293T/17細胞株是293T (293tsA1609neo)細胞株的衍生株。 293T 是293細胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉衍生株。 293T細胞進(jìn)行克隆，檢測pBND和pZAP載體，得到一株能生成高滴度感染逆轉錄病毒的衍生株，293T/17。 細胞持續表達猿病毒40(SV40)大T抗原，而因其高轉染能力篩選到17號克隆。 293T/17細胞用pCRIPenv-和pCRIPgag-2載體轉染得到ANJOU 65 細胞株。 ANJOU 65細胞再用pCRIPgag-2 和 pGPT2E載體轉染得到親宅性外殼表達細胞株BOSC 23。ANJOU 65細胞用攜帶gpt抗性基因的pCRIPAMgag載體轉染得到Bing 雙向性表達包裝細胞株。

細胞特性

1） 來(lái)源：人 胚胎腎臟

2） 形態(tài)：上皮樣細胞  貼壁生長(cháng)

3） 含量：>1x106  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的完quan培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上，可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的完quan培養基來(lái)培養細胞。  收到細胞后一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。

293T/17 人胚腎細胞  STR鑒定              

一．培養基及培養凍存條件準備

一．培養基及培養凍存條件準備

1）準備DMEM培養基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%； 雙抗 1%,  建議在wan全培養基中添加（L-谷an酰胺（2mM）1%；NEAA  1% ）。

注意：

1.該細胞貼壁能力較弱，培養時(shí)可酌情使用預鋪0.2%明膠的培養瓶/培養皿。在運輸過(guò)程中，細胞會(huì )漂浮聚團生長(cháng)，收到細胞時(shí)同時(shí)收集懸浮細胞和貼壁細胞離心重懸后傳代培養。

2.如果發(fā)生293T/17細胞不貼壁，漂浮在培養基中的現象，可以酌情在培養基中添加（L-谷an酰胺（2mM）1%；NEAA  1% ）以便正確緩沖培養基。促使懸浮細胞更好的存活以及細胞更容易貼壁。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二．細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完quan培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完quan培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完quan培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

該細胞貼壁能力較弱(半貼壁半懸?。┘毎?，，傳代可以參考以下方法：

1. 收集：將培養瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會(huì )脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白mei、-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。

3. 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來(lái)的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。

下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時(shí)按照細胞傳代的過(guò)程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來(lái)決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱(chēng)、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。