H9C2大鼠心肌細胞/種屬鑒定

H9C2大鼠心肌細胞/種屬鑒定

細胞介紹

B. Kimes and B. Brandt從源于BD1X大鼠胚胎心臟組織的克隆細胞株亞克隆了H9c2(2-1)細胞株，它表現許多骨骼肌的特性。這個(gè)細胞株中的成肌細胞能融合形成多核的肌管，并對乙酰的刺激發(fā)生反應。如果培養基中的血清濃度下降到1%，融合發(fā)生得很快。

細胞特性

1） 來(lái)源：心臟

2） 形態(tài)：成肌細胞，貼壁生長(cháng)

3） 含量：>1x10^6  細胞數

4） 規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h，若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細胞狀態(tài)的依據。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過(guò)程中會(huì )因振動(dòng)脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀(guān)察細胞的生長(cháng)密度若在60%以下，可去除培養瓶中灌液培養基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養瓶中）,加入新配制的wan全培養基6-8mL，放到細胞培養箱中繼續培養。若細胞生長(cháng)密度達70%-80%以上，可以對細胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運輸振動(dòng)脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養基（灌液培養基）不能再用來(lái)培養細胞，請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的wan全培養基來(lái)培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1：2傳代 。

H9C2大鼠心肌細胞/種屬鑒定

一．培養基及培養凍存條件準備

1） 準備DMEM （含1.5g/L NaHCO3推薦：iCell-128-0001）或(GIBCO,貨號12800017，添加NaHCO3 1.5g/L)培養基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗1%。

注意: 該細胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培養基中生長(cháng)良好，大部分品牌的DMEM含有較高濃度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培養基培養細胞時(shí)需要提高CO2濃度（7%-10%）。

2) 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二．細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mLwan全培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，wan全培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8mlwan全培養基的培養瓶（或皿）中37℃培養過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）yi蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長(cháng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來(lái)終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的wan全培養基以保持細胞的生長(cháng)活力，后續傳代根據實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時(shí)凍存一批細胞種子以備后續實(shí)驗使用。

下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時(shí)按照細胞傳代的過(guò)程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來(lái)決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱(chēng)、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

　　鏡像綺點(diǎn)（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

　　一、原代細胞服務(wù)：

　?。?）各類(lèi)模式哺乳動(dòng)物的多種原代細胞資源

　?。?）多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源

　?。?）原代細胞分離和培養相關(guān)試劑、kit、培養基添加劑等

　?。?）原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗外包服務(wù)

　　二、細胞系服務(wù)：

　?。?）細胞株/系培養、增殖、凍存和相關(guān)說(shuō)明書(shū)

　?。?）細胞系培養過(guò)程的技術(shù)指導

　?。?）細胞系培養基、添加劑、血清及相關(guān)生長(cháng)因子、試劑等

　　三、iPS細胞服務(wù)：

　?。?）iPS細胞基礎培養（有滋養層or無(wú)滋養層）

　?。?）iPS細胞增殖及冷凍保存

　?。?）iPS基礎培養技術(shù)實(shí)習

　?。?）新藥及實(shí)驗儀器上市前評估

　　四、其他技術(shù)外包服務(wù)、客戶(hù)定制服務(wù)等

沒(méi)有相關(guān)產(chǎn)品信息...