人宮頸癌癌細(xì)胞HELA培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

　　人宮頸癌癌細(xì)胞HELA培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

　　

　　1、準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，90%；北美胎牛血清(UnitedStates，GIBCO，貨號16000-044)，10%。

　　

　　2、培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

　　

　　3、凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
 

　　

　　人宮頸癌癌細(xì)胞HELA處理：

　　

　　1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

　　

　　2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

　　

　　對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

　　

　　（1）棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

　　

　?。?）加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。

　　

　?。?）輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。

　　

　　（4）移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

　　

　　3、人宮頸癌癌細(xì)胞HELA凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，先要消化處理并進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。消化方法按照細(xì)胞傳代方法的1-3步驟進(jìn)行，最后的重懸液使用血清。懸浮細(xì)胞直接計數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。