人成纖維細胞的分離培養制備方式

 成纖維細胞屬于由中胚層分化而來(lái)的間質(zhì)細胞。細胞來(lái)源于人正常的皮膚組織，成纖維細胞是一種貼壁培養方式的細胞，由于這些細胞非常容易培養，它們已經(jīng)被廣泛用于細胞和分子生物學(xué)研究中。

       一般而言，成纖維細胞能夠分泌I型和III型膠原等細胞外基質(zhì)，并且研究表明不同器官中的成纖維細胞有顯著(zhù)的不同。傷口修復時(shí)，成纖維細胞由可增殖，可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的，可重塑基質(zhì)的表型，同時(shí)，它們會(huì )分泌大量的透明質(zhì)酸來(lái)應對修復時(shí)的炎癥反應。

       以下是鏡像綺點(diǎn)提供的一種人成纖維細胞的制備方式（僅供參考）：
       1.首先在分離成纖維細胞時(shí)要做到在無(wú)菌條件下進(jìn)行，打開(kāi)生物安全柜紫外燈30min作無(wú)菌處理。
       2.將手術(shù)廢棄的皮膚組織浸泡75%酒精，消毒2min，
       3.將皮膚組織置含P/S的PBS中清洗至少3遍，
       4.然后用眼科剪除去脂肪及結締組織等，
       5.將皮膚剪成0.5*0.5 cm小塊，放入dish中，加0.1%的dispase溶液，封口膜封口，4℃冰箱過(guò)夜消化，
       6.第二天，用鑷子將表皮與分開(kāi)（薄的那層是表皮，厚的那層是），
       7.將剪碎，移至離心管，用0.1%膠原Ⅰ型酶+0.1%膠原Ⅱ型酶+0.1%膠原Ⅳ型酶+ 37℃水浴鍋中消化至少2 h（視消化程度而定），
       8.用100 μm網(wǎng)篩過(guò)濾，
       9.取濾液，300 g，離心5 min，
       10.用*培養基重懸沉淀，
       11.鋪瓶，
       12.隔天換液。
       以上是皮膚成纖維細胞分離培養的一種方式，不同的技術(shù)人員分離培養的方法也不同，使用的試劑比例也不盡相同，皮膚成纖維細胞特異性纖維連接蛋白或波形蛋白表達檢測，采用細胞免疫熒光技術(shù)。細胞純度可高達于90%，所有的細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。