人胚腎細胞293T培養(yǎng)步驟主要如下

　　人胚腎細胞293T是293細胞株插入SV40T-抗原的溫度敏感基因后產(chǎn)生的高轉(zhuǎn)染效率的衍生細胞株。人胚腎細胞；293，上皮狀，早期報道中指出該細胞基因組中含有腺病毒5（Ad5）基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過對Ad5的插入點的克隆測序發(fā)現(xiàn)，Ad5的1～4344位線性核苷酸整合入細胞染色體19q13.2。該細胞為人類腺病毒載體擴增的宿主?？杀磉_異常的玻連蛋白的細胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。生物安全級別為2級。

　　人胚腎細胞293T培養(yǎng)步驟主要如下：

　　1、培養(yǎng)皿/瓶用槍頭或移液管吸去原培養(yǎng)液；

　　2、無菌PBS或無菌生理鹽水洗滌3次（按培養(yǎng)體積加入）；

　　3、加入適量胰酶消化適當時間（一般胰酶為0.25%；9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，一次加入1mL胰酶。消化時間視細胞類型等多種情況綜合考慮，一般如果是細胞株，非原代培養(yǎng)，消化1－2分鐘足矣）；

　　4、用槍頭吹打數(shù)十次（視細胞類型而定。一般細胞株30－50次吧，耗時一般2分鐘左右）；

　　5、加入適量體積*培養(yǎng)基終止胰酶消化（如果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，可以加入1mL*培養(yǎng)基；現(xiàn)在培養(yǎng)瓶（皿）里有2mL溶液）。

　　6、現(xiàn)在可以將溶液進行分瓶（2mL）。如果是細胞株，直接均分到兩個培養(yǎng)瓶（皿）里。如果是原代培養(yǎng)，可以根據(jù)消化時間來對細胞進行分離；因此可以將溶液（2mL）都轉(zhuǎn)入新的培養(yǎng)瓶（皿）。

　　7、將兩個培養(yǎng)瓶（皿）補足*培養(yǎng)基到正常體積（果是9cm/10cm培養(yǎng)皿和25cm培養(yǎng)瓶，為5mL*培養(yǎng)液）

　　8、鏡下觀察。剛剛傳代細胞還沒貼壁，懸浮在溶液中，呈圓形。一般2h之內(nèi)會貼壁，如果已經(jīng)貼壁，根據(jù)細胞類型有不同的形態(tài)，但通常都不是圓形。

　　9、鏡下觀察無誤之后，再放入細胞培養(yǎng)箱。培養(yǎng)瓶（皿）放入之前，可以用消毒酒精先擦一下。

　　10、人胚腎細胞293T傳代之后，第二天細胞換液一次。當然，也可以視情況而定。