人乳腺癌細胞MDA-MB-231的傳代步驟是怎樣的？

　　人乳腺癌細胞MDA-MB-231是一種人乳腺癌細胞系，常用于腫瘤轉移和侵襲性的研究。該細胞系來(lái)源于一個(gè)四級侵襲性乳腺癌患者的異種移植物，在體內形成了高度轉移和惡性侵襲的表現。

 

　　通常在無(wú)菌環(huán)境中使用層流罩。培養基的更換與細胞的生長(cháng)速度密切相關(guān)。如果在6-16小時(shí)內更換培養基，可以去除殘留的亞甲基楓樹(shù)和死細胞?？捎糜谶M(jìn)一步科學(xué)研究，不能用于治療等方面。

　　血清的類(lèi)型和質(zhì)量會(huì )對人乳腺癌細胞MDA-MB-231的生長(cháng)產(chǎn)生影響。血清是細胞培養非常重要的營(yíng)養來(lái)源。錯誤使用血清會(huì )使細胞無(wú)法存活。細胞無(wú)法存活的另一個(gè)原因是培養基。每個(gè)細胞系都有其特定的用途和適應的細胞培養基。如果突然使用不同培養條件的培養基，大多數細胞不能立即適應。
 

　　1、用75%酒精噴灑整個(gè)培養瓶消毒，將其平躺置于培養箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖，然后置于無(wú)菌操作臺，打開(kāi)瓶口，將其中的培養液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養基(以T25培養瓶為例)并置于細胞培養箱中培養，根據細胞生長(cháng)狀況及培養基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代，一般2到3天換一次液；

　　2、待細胞長(cháng)滿(mǎn)瓶底面積80%-90%，需要對其進(jìn)行傳代，傳代比例為1:3到1:6；

　　3、人乳腺癌細胞MDA-MB-231傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53mMEDTA消化液置于37°預熱，倒掉培養瓶中的培養基，往培養瓶中加入3-5mlPBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2ml預熱好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀(guān)察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見(jiàn)細胞脫落為最佳消化時(shí)間，記錄最佳消化時(shí)間，以便于下次消化），消化好后加入3ml培養基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后收集細胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養基重懸細胞，進(jìn)行傳代。
 

　　MDA-MB-231細胞具有以下特征：

　　高度轉移能力：該細胞系可以從原位腫瘤進(jìn)入血液或淋巴管道，并在機體其他部位進(jìn)行遠處轉移；

　　低黏附性：這類(lèi)腫瘤細胞容易在無(wú)血清培養條件下暴發(fā)式擴張，并不容易貼壁死亡；

　　快速增殖：MDA-MB-231生長(cháng)快、分裂率高，呈纖錐型或多角形；

　　藥物耐受性強：經(jīng)過(guò)多次化學(xué)治療后，部分患者可能出現藥物耐受情況。

　　缺少ERα雌激素受體表達，即是TNBC(三陰)（Triple-negative breast cancer）之一。