你真的了解人臍靜脈細胞HUVEC實(shí)驗步驟嗎？

　　人臍靜脈細胞HUVEC是一種來(lái)源于臍帶組織的干細胞。它是臍靜脈的重要細胞之一，在理論上可以無(wú)限期地通過(guò)。因此，人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）經(jīng)常用于血管內皮細胞實(shí)驗，而不是靜脈內皮細胞或動(dòng)脈內皮細胞。臍靜脈內皮細胞易于獲得且來(lái)源充足，因此，臍靜脈內皮細胞經(jīng)常用于血管內皮研究。那么，您真的了解它的培養實(shí)驗步驟嗎？
 

　　1、將15-20cm長(cháng)的新生兒臍帶儲存在無(wú)菌PBS溶液中。（注意：應在4℃下保存24小時(shí)，在室溫下保存不超過(guò)6小時(shí)，否則將被丟棄。）

　　2、將鈍針插入臍靜脈管，并用無(wú)菌PBS溶液沖洗3-5次，直到將臟血洗凈為止。

　　3、用手術(shù)鉗夾住臍帶下端，添加15ml膠原酶（1mg/ml）在室溫下消化15-20分鐘，并不時(shí)搖動(dòng)臍帶。

　　4、消化后，松開(kāi)下部的手術(shù)鉗，將消化液倒入50ml無(wú)菌離心管中，并用無(wú)菌PBS溶液沖洗臍帶2-3次。

　　5、離心收集的液體（2000rpm）3分鐘。

　　6、除去上清液，加入10mlM199培養基（添加10u/mlbFGF），用肘部吹動(dòng)細胞，將所有液體轉移到裝有明膠的培養瓶中，并在37℃下培養。（注：在每個(gè)培養瓶中加入3-4ml無(wú)菌1％明膠溶液，充分搖動(dòng)以使明膠溶液*覆蓋瓶底，并在37℃下孵育至少2小時(shí)。使用前將明膠溶液倒入。明膠涂層有助于細胞粘附。）

　　7、將人臍靜脈細胞HUVEC培養24小時(shí)后，倒出培養基并用無(wú)菌PBS溶液洗滌2-3次。洗去紅細胞和死細胞，并加入10ml新鮮的M199培養基。

　　8、應每2天更換一次介質(zhì)（每次應更換2/3的介質(zhì)）。

　　9、培養5-7天后，細胞可以生長(cháng)到80-90％的單層，然后可以傳代。

　　10、倒出培養基，用無(wú)菌PBS溶液洗滌2-3次，添加2-3ml消化液（0.25％胰蛋白酶+0.1％EDTA）消化細胞。在顯微鏡下觀(guān)察。一旦細胞變圓，添加2-3次含血清的DMEM培養基以終止反應。

　　11、用彎頭吹干細胞，然后將消化的細胞以2000rpm的速度轉移到50ml無(wú)菌離心管中3分鐘。

　　12、倒出上清液，加入10ml新鮮培養基。通常，可以在一瓶中傳代3-4瓶細胞，然后據此傳代培養。

　　13、人臍靜脈細胞HUVEC通常傳代2-3代（約20天）用于各種實(shí)驗。